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Artículos científicos

Análisis funcional de proteínas mutadas MUTYH asociadas con poliposis adenomatosa familiar

información clave

fuente: Reparación del ADN

año: 2010

autores: D'Agostino VG, Minoprio A, Torreri P, Marinoni I, Bossa C, Petrucci TC, Albertini AM, Ranzani GN, Bignami M, Mazzei F

resumen / resumen:

La ADN glicosilasa MUTYH elimina específicamente la adenina mal incorporada por las polimerasas replicativas opuestas a la purina oxidada 8-oxo-7,8-dihidroguanina (8-oxoG). Una actividad proteica defectuosa da como resultado la acumulación de transversiones G> T debido a desajustes 8-oxoG: A no reparados. En los seres humanos, las mutaciones de la línea germinal de MUTYH se asocian con una forma recesiva de poliposis adenomatosa familiar y predisposición al cáncer colorrectal (poliposis asociada a MUTYH, MAP). Aquí estudiamos la capacidad de reparación de las variantes de MUTYH R171W, E466del, 137insIW, Y165C y G382D, identificadas en pacientes con MAP. Tras la expresión y purificación de proteínas humanas de un sistema bacteriano, investigamos la capacidad de incisión de MUTYH en un sustrato 8-oxoG: A mediante ensayos estándar de glicosilasa. Por primera vez, empleamos la tecnología de resonancia de plasmón de superficie (SPR) para el registro en tiempo real de la asociación / disociación de variantes de tipo salvaje y MUTYH de un sustrato de ADN 8-oxoG: A. En comparación con la proteína de tipo salvaje, las variantes R171W, E466del e Y165C mostraron una reducción severa en la afinidad de unión hacia el sustrato, mientras que los mutantes 137insIW y G382D manifestaron solo una ligera disminución principalmente debido a una tasa de asociación más lenta. Esta unión reducida siempre se asoció con el deterioro de la actividad glicosilasa, con la eliminación de adenina totalmente abrogada en R171W, E466del e Y165C y sólo parcialmente reducida en 137insIW y G382D. Nuestros hallazgos demuestran que el análisis SPR es adecuado para identificar un comportamiento enzimático defectuoso incluso cuando las proteínas mutantes muestran alteraciones menores en el reconocimiento del sustrato.

organización: Universidad de Pavía

DOI: 10.1016 / j.dnarep.2010.03.008

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